Produkti

LecA (PA-IL) ir citotoksisks lektīns un adhezīns, ko ražo Pseudomonas aeruginosa, kas ar augstu specifiskumu un afinitāti saista hidrofobus galaktozīdus.Izmantojot lecA-egfp translācijas saplūšanu un bioplēves ekstracelulārās matricas imūnblota analīzi, mēs parādām, ka lecA tiek ekspresēts bioplēvēs audzētās šūnās.Statiskajās bioplēves testos gan polistirolam, gan nerūsējošajam tēraudam bioplēves dziļums un virsmas pārklājums tika samazināts lecA mutācijas dēļ un uzlabots LecA pārmērīgi producējošā celmā PAO-P47.Augšana izopropil-beta-D-tiogalaktozīda (IPTG) vai p-nitrofenil-alfa-D-galaktozīda klātbūtnē kavēja arī bioplēves virsmas pārklājumu ar pamatcelmu PAO-P47, bet ne lecA mutantu uz tērauda kuponiem. NPG).Turklāt nobriedušas savvaļas tipa bioplēves, kas veidojas bez šo hidrofobo galaktozīdu, var izkliedēt, pievienojot IPTG.Turpretim p-nitrofenil-alfa-L-fukozes (NPF) pievienošana, kurai ir augsta afinitāte pret P. aeruginosa LecB (PA-IIL) lektijām, neietekmēja bioplēves veidošanos vai izkliedi.P. aeruginosa PAO1 planktona augšanu neietekmēja IPTG, NPG vai NPF klātbūtne, kā arī celms nespēja izmantot šos cukurus kā oglekļa avotus, kas liecina, ka novērotā ietekme uz bioplēves veidošanos bija saistīta ar LecA liganda konkurējošo inhibīciju. saistošs.Līdzīgi rezultāti tika iegūti arī bioplēvēm, kas audzētas dinamiskos plūsmas apstākļos uz tērauda kuponiem, kas liecina, ka LecA veicina P. aeruginosa bioplēves arhitektūru dažādos vides apstākļos.

Arabidopsis augu lapās ir konstatēta alfa-L-fukozidāze (EC 3.2.1.51), kas spēj atbrīvot t-fukozila atlikumu no ksiloglukāna oligosaharīdu sānu ķēdes.Turklāt alfa-L-fukozidāze ar līdzīgu substrāta specifiku tika attīrīta no kāpostu (Brassica oleracea) lapām, lai izveidotu vienu joslu SDS-PAGE.No šīs olbaltumvielu joslas tika iegūtas divas peptīdu sekvences, un tās tika izmantotas, lai identificētu Arabidopsis gēnu, kas kodē alfa-fukozidāzi, kuru mēs ierosinām saukt par AtFXG1.Turklāt ir atrasts arī Arabidopsis gēns ar homoloģiju ar zināmām alfa-L-fukozidāzēm, un mēs ierosinājām to nosaukt par AtFUC1.Gan AtFXG1, gan ATFUC1 tika heteroloģiski ekspresēti Pichia pastoris šūnās, un alfa-L-fukozidāzes aktivitātes izdalījās barotnē.Alfa-L-fukozidāze, ko kodē AtFXG1, bija aktīva pret oligosaharīdiem no ksiloglukāna XXFG, kā arī pret 2'-fukozillaktitolu, bet ne pret p-nitrofenil-alfa-L-fukopiranozīdu.Tomēr heteroloģiski izteiktais AtFUC1 bija aktīvs tikai pret 2'-fukozillaktitolu.Tādējādi pirmajam ir jābūt saistītam ar ksiloglukāna metabolismu.