Produkti

Kodolproteīna Lamin-A mutācijas formas kodola uzkrāšanās, ko sauc par Progerin (PG) vai Lamin AΔ50, notiek Hačinsona-Gilforda Progeria sindromā (HGPS) vai Progeria, kas ir paātrināta novecošanās slimība.Viens no galvenajiem šī ģenētiskā traucējuma simptomiem ir zemādas tauku zudums dramatiskas lipodistrofijas dēļ. Mēs stabili inducējām cilvēka PG un GFP (Green Fluorescent Protein) ekspresiju kā kontroli 3T3L1 šūnās, izmantojot lentivīrusu sistēmu, lai pētītu PG ekspresijas ietekme uz šīs šūnu līnijas diferenciācijas spēju, kas ir viens no visbiežāk izmantotajiem adipogēnajiem modeļiem.Kvantitatīvā proteomika (iTRAQ) tika veikta, lai izpētītu PG uzkrāšanās ietekmi.Vairāki modulētie proteīni tika apstiprināti ar imūnblotēšanu un reāllaika PCR.Mitohondriju funkcija tika analizēta, mērot a) mitohondriju bazālo aktivitāti, b) superoksīda anjonu veidošanos un c) dažāda elpošanas ķēdes kompleksa individuālo efektivitāti. Mēs atklājām, ka pārmērīga PG ekspresija ar lentivīrusa gēnu piegādi noved pie proliferācijas ātruma samazināšanās un adipogēnās spējas defekti, salīdzinot ar kontroli.Kvantitatīvā proteomikas analīze parādīja 181 proteīnu, kas būtiski (p<0,05) ir modulēts PG ekspresējošos preadipocītos.PG ekspresējošās šūnās ir traucēta mitohondriju funkcija.Konkrēti, mēs esam atklājuši kompleksa I aktivitātes palielināšanos un superoksīda anjona pārprodukciju.Inkubācija ar reaktīvo skābekļa sugu (ROS) savācējiem veicina autofagiskās proteolīzes samazināšanos, ko atklāj LC3-II/LC3-I attiecība. PG ekspresija 3T3L1 šūnās veicina izmaiņas vairākos bioloģiskos procesos, tostarp citoskeleta struktūrā, lipīdu metabolismā, kalcijā. regulēšana, translācija, proteīnu locīšana un enerģijas ražošana, ko veic mitohondriji.Mūsu dati stiprina ROS uzkrāšanās ieguldījumu priekšlaicīgas novecošanās fenotipā un izveido saikni starp mitohondriju disfunkciju un proteostāzes zudumu HGPS.