Produkti

Ar Kapoši sarkomu saistītā herpesvīrusa (KSHV) ORF45 proteīns ir gammaherpesvīrusam specifisks tūlītējas agrīnas apvalka proteīns.Mūsu iepriekšējie pētījumi ir atklājuši tās izšķirošo lomu gan agrīnā, gan vēlīnā KSHV infekcijas stadijā.Šajā pētījumā mēs pētījām ORF45 mijiedarbību, izmantojot monoklonālo antivielu paneli.Papildus iepriekš identificētajām ekstracelulārās regulētās kināzes (ERK) un p90 ribosomālās S6 kināzes (RSK) olbaltumvielām mēs atradām vairākus citus attīrītus proteīnus, tostarp ievērojamus, kuru izmērs ir ∼ 38 kDa un ∼ 130 kDa.Masu spektrometrija atklāja, ka 38 kDa proteīns ir vīrusa ORF33 un 130 kDa proteīns ir šūnu USP7 (ubikvitīnam specifiskā proteāze 7).Mēs kartējām ORF33 saistošo domēnu ar ļoti konservētajām ORF45 karboksilgala 19 aminoskābēm (aa) un USP7 saistošo domēnu ar ziņoto konsensa motīvu ORF45 centrālajā reģionā.Izmantojot imunofluorescences krāsošanu, mēs novērojām ORF45 kolokalizāciju ar ORF33 vai USP7 gan transfektētos apstākļos, gan KSHV inficētās šūnās.Turklāt mēs pamanījām no ORF45 atkarīgu ORF33 / USP7 daļas pārvietošanu no kodola uz citoplazmu.Mēs noskaidrojām, ka ORF45 izraisīja ORF33 olbaltumvielu uzkrāšanās palielināšanos, kas tika atcelta, ja tika izdzēsts ORF45 ORF33 vai USP7 saistošais domēns.Turklāt ORF45 konservētā karboksilgala dzēšana KSHV genomā krasi samazināja ORF33 proteīna līmeni ar KSHV inficētajās šūnās un atcēla pēcnācēju virionu veidošanos.Kopumā mūsu rezultāti atklāj ne tikai jaunus ORF45 mijiedarbības komponentus, bet arī parāda, ka mijiedarbībai starp šiem proteīniem ir izšķiroša nozīme KSHV lītiskajā replikācijā. Ar Kapoši sarkomu saistītais herpesvīruss (KSHV) ir vairāku cilvēku vēža izraisītājs.KSHV ORF45 ir daudzfunkcionāls proteīns, kas nepieciešams KSHV lītiskajai replikācijai, taču precīzi mehānismi, ar kuriem ORF45 veic savas kritiskās funkcijas, nav skaidri.Mūsu iepriekšējie pētījumi atklāja, ka viss ORF45 proteīns šūnās pastāv kompleksos ar augstu molekulmasu.Tāpēc mēs centāmies raksturot ORF45 mijiedarbību, lai sniegtu ieskatu tās lomās lītiskās replikācijas laikā.Izmantojot monoklonālo antivielu paneli, mēs apsekojām ORF45 mijiedarbību KSHV inficētajās šūnās.Mēs identificējām divus jaunus ORF45 saistošos partnerus: vīrusa proteīnu ORF33 un šūnu ubikvitīnam specifisko proteāzi 7 (USP7).Mēs arī parādām, ka mijiedarbība starp ORF45 un ORF33 ir ļoti svarīga efektīvai KSHV vīrusu daļiņu ražošanai, kas liecina, ka mērķtiecīga iejaukšanās šajā mijiedarbībā var būt jauna stratēģija KSHV lītiskās replikācijas inhibēšanai.