Produkti

Fluoresceīna un fluoresceīna metilestera monogalaktopiranozīdi: sintēze, fermentatīvā hidrolīze ar biotinilētu β-galaktozidāzi un translācijas difūzijas koeficienta noteikšana

Fluoresceīna monoglikozīdi (d-galaktopiranozīds (FMG) un d-glikopiranozīds) un to metilesteris (MFMG) ir sagatavoti no acetobromoglikozes/galaktozes un fluoresceīna metilestera ar labu ražu.Veikti galakto atvasinājumu fermentatīvās hidrolīzes eksperimenti (izmantojot biotinilētu β-galaktozidāzi) un aprēķināti kinētiskie parametri.Hidrolīzes laikā novērota fluorescences intensitātes palielināšanās 15–20 reizes.Īsā laikā un zemā substrāta koncentrācijā ir novērots lineārs fluorescences pieaugums, padarot šos savienojumus par noderīgām un jutīgām zondēm galaktozidāzēm.Michaelis-Menten konstantes (Km) vērtības lielums MFMG ir lielāks nekā FMG, kas liecina par iespējamu fluorogēnā substrāta konformācijas izmaiņām.Km vērtība biotinilētam β-Gal ar FMG ir zemāka nekā dabiskajam enzīmam.Šis novērojums norāda uz biotinilētā enzīma augstāku substrāta afinitāti salīdzinājumā ar dabisko enzīmu.Translācijas difūzijas koeficienti ir izmērīti gan fluorogēniem substrātiem, gan abiem produktiem, izmantojot fluorescences korelācijas spektroskopiju.Fluorogēno substrātu un fermentatīvās hidrolīzes produktu translācijas difūzijas koeficienti ir izmērīti kā līdzīgi, diapazonā no 3,5–4,5 × 10–10 m2 s–1.Tādējādi fermentatīvās kinētikas uzlabošanās vai aizkavēšanās substrāta un produkta translācijas mobilitātes atšķirību dēļ nav tik acīmredzama.