Produkti

DNS bāzu oksidatīvie bojājumi parasti izraisa oksidētu purīnu, īpaši 7,8-dihidro-8-oksoguanīna (8-oksoG) un 7,8-dihidro-8-oksoadenīna (8-oksoA) veidošanos, pirmais ir labs zināms mutagēns bojājums.Tā kā 8-oksoG ir viegli pakļauts tālākai oksidācijai, salīdzinot ar normālām bāzēm, bāzes ievietošana DNS sintēzes laikā pretī oksidētai 8-oksoG formai tika pētīta in vitro.Sintētiskā veidne, kas satur vienu 8-oksoG bojājumu, vispirms tika apstrādāta ar dažādiem viena elektrona oksidētājiem vai vienota skābekļa apstākļos un pēc tam pakļauta praimera pagarinājumam, ko katalizēja Klenova fragmenta ekso- (Kf exo-), teļa aizkrūts dziedzera DNS polimerāzes alfa (pol alfa) ) vai cilvēka DNS polimerāzes beta (pol beta).Saskaņā ar iepriekšējiem ziņojumiem dAMP un dCMP tiek ievietoti selektīvi pretī 8-oksoG ar visām trim DNS polimerāzēm.Interesanti, ka tika konstatēts, ka 8-oksoG oksidēšana izraisa dAMP un dGMP ievietošanu pretī bojājumam ar Kf exo- ar pārejošu praimera pagarinājuma inhibīciju, kas notiek modificētās bāzes vietā.Turklāt bojājums veido bloku DNS sintēzes laikā ar pol alfa un pol beta.Eksperimenti ar 8-oksoA modificēta šablona oligonukleotīdu liecina, ka gan 8-oksoA, gan oksidētā 8-oksoA forma tieši ievieto dTMP ar Kf exo-.8-oksoG saturošu oligonukleotīdu masas spektrometriskā analīze pirms un pēc oksidēšanas ar IrCl62 atbilst galvenokārt 8-oksoG vietas oksidācijai, kā rezultātā veidojas guanidinohidantoīna daļa kā galvenais produkts.Netika iegūti pierādījumi par abāzisku vietu veidošanos.Šie rezultāti parāda, ka 8-oksoG oksidēta forma, iespējams, guanidinohidantoīns, var izraisīt nepareizu dNTP nolasīšanu un nepareizu ievietošanu DNS sintēzes laikā.Ja šāds process notiktu in vivo, tas būtu punktveida mutagēns bojājums, kas noved pie G-->T un G-->C transversijām.Tomēr atbilstošā 8-oksoA oksidētā forma galvenokārt parāda pareizu T ievietošanu DNS sintēzes laikā ar Kf exo-.