Produkti

Graves orbitopātijas (GO) progresēšanā ir pierādīta orbitālo fibroblastu diferenciācija nobriedušos adipocītos un sekojoša taukaudu uzkrāšanās.Autofagija ir iesaistīta adipoģenēzē, taču maz ir zināms par autofagijas lomu GO ierosināšanā un progresēšanā.Šī pētījuma mērķis ir izpētīt autofagijas lomu GO patoģenēzē. Tika analizēti orbitālo taukaudu/saistaudu eksplanti no pacientiem ar GO un no normāliem subjektiem, kā arī izolēti orbitālie fibroblasti.Adipoģenēze tika ierosināta, izmantojot diferencējošu barotni ar ūdeņraža peroksīdu vai bez tā, un autofagija tika manipulēta, izmantojot bafilomicīnu A1 un uz Atg5 mērķētu īsu matadata RNS (shRNS).Autofagosomas tika identificētas ar elektronu mikroskopiju.Ar autofagiju saistīto gēnu ekspresija un ar adipoģenēzi saistītie transkripcijas faktori tika analizēti ar reālā laika reversās transkripcijas-polimerāzes ķēdes reakciju un / vai Western blot analīzi.Lipīdu pilienu uzkrāšanās tika pārbaudīta ar Oil Red O krāsošanu. Autofagiskās vakuolas bija vairāk sastopamas GO šūnās nekā šūnās, kas nav GO (p<0,05).Ar autofagiju saistīto gēnu ekspresija bija ievērojami augstāka GO audos un šūnās nekā attiecīgi ne-GO.Interleikīns-1β palielināja LC3-II, p62 un Atg7 proteīnu GO šūnās.Autofagosomu uzkrāšanās tika parādīta adipoģenēzes 4. dienā un samazinājās līdz 10. dienai, kā arī lipīdu pilienu veidošanās.LC3 un p62 proteīnu ekspresija palielinājās 48 stundu laikā pēc diferenciācijas un pakāpeniski samazinājās no 4. līdz 10. dienai. Ārstēšana ar bafilomicīnu A1 un Atg5 notriekšana ar shRNS inhibēja lipīdu pilienu uzkrāšanos un nomāca adipogēno marķieru ekspresiju. Autofagija tika palielināta GO audos un šūnās, salīdzinot ar audus un šūnas, kas nav GO, kas liecina, ka autofagijai ir nozīme GO patoģenēzē.Autofagijas manipulācijas var būt GO terapeitiskais mērķis.