Produkti

Mycobacterium tuberculosis cilvēka saimniekorganismā var saglabāties gadu desmitiem.Tiek uzskatīts, ka stingriem reakcijas ceļiem, kas saistīti ar neorganisko polifosfātu [poli(P)], ko sintezē un hidrolizē attiecīgi polifosfāta kināze (PPK) un eksopolifosfatāze (PPX), ir galvenā regulējošā loma baktēriju noturībā.Šeit mēs parādām, ka M. tuberculosis poli(P) uzkrāšanās ir īslaicīgi saistīta ar bacilāru augšanas ierobežojumu.Mēs arī identificējam M. tuberculosis Rv1026 kā jaunu eksopolifosfatāzi ar hidrolītisku aktivitāti pret garās ķēdes poli(P).Izmantojot tetraciklīnu inducējamu ekspresijas sistēmu, lai samazinātu Rv1026 (ppx2) ekspresiju, mēs atklājām, ka M. tuberculosis poly(P) uzkrāšanās palēninās augšanu un samazina jutību pret izoniazīdu, palielina izturību pret karstumu un skābes pH, kā arī uzlabo intracelulāro dzīvildzi. makrofāgu infekcijas laikā.Izmantojot transmisijas elektronu mikroskopiju, ppx2 notriektajam celmam bija palielināts šūnu sienas biezums, kas bija saistīts ar samazinātu šūnu sienas caurlaidību pret hidrofilām zālēm, nevis zāļu izplūdes sūkņu indukciju vai izmainītu bioplēves veidošanos, salīdzinot ar tukšā vektora kontroli.Transkriptomiskā un metabolomiskā analīze atklāja ppx2 notriekšanas vielmaiņas lejupslīdi, ko raksturo samazināta transkripcija un translācija un glicerīna-3-fosfāta līmeņa pazemināšanās.Rezumējot, poli(P) ir svarīga loma M. tuberculosis augšanas ierobežošanā un vielmaiņas lejupslīdē, un tas veicina antibiotiku toleranci, mainot šūnu sieniņu caurlaidību. Stingrā reakcija, kas ietver regulējošās molekulas neorganisko polifosfātu [poli(P)] un (p). Tiek uzskatīts, ka )ppGpp veicina Mycobacterium tuberculosis noturību.Šajā pētījumā mēs identificējām jaunu enzīmu (Rv1026, PPX2), kas ir atbildīgs par garās ķēdes poli (P) hidrolizēšanu.Ģenētiski modificētam M. tuberculosis celmam, kam bija ppx2 gēna deficīts, tika konstatēts paaugstināts poli(P) līmenis, kas bija saistīts ar agrīnu baktēriju augšanas apstāšanos un samazinātu jutību pret pirmās rindas zālēm izoniazīdu, kā arī palielināja baktēriju izdzīvošanu stresa iedarbības laikā. apstākļos un makrofāgos.Salīdzinot ar kontroles celmu, mutants uzrādīja palielinātu šūnu sienas biezumu un samazinātu zāļu caurlaidību.Globālā gēnu ekspresija un metabolītu analīze atklāja samazinātu transkripcijas un translācijas mehānismu ekspresiju un izmaiņas oglekļa avota izmantošanā.Rezumējot, poli(P) līdzsvara regulēšana ir būtiska M. tuberculosis noturīgai veidošanās procesam.