Produkti

Viens no faktoriem, kas kavē reģeneratīvās medicīnas klīnisku pielietojumu deģeneratīvām skrimšļa slimībām, ir piemērots šūnu avots.Hondrocīti, vienīgais skrimšļa šūnu veids, kas audzēti in vitro kultūras apstākļos, lai palielinātu šūnu skaitu, zaudē savu fenotipu, kā arī spēju radīt hialīna skrimšļa audus.Šajā pētījumā mēs noskaidrojām, ka no seruma un augšanas faktora brīva trīsdimensiju (3D) kultūras sistēma atjauno šķērsoto hondrocītu spēju veidot skrimšļa audus in vitro, kas ir process, kurā iesaistīts sox9. Liellopu locītavu hondrocīti tika pasēti divreiz, lai ļautu palielināt šūnu skaitu (P2) un kultivēt lielā blīvumā uz 3D kolagēna II tipa pārklātām membrānām barotnēs ar augstu glikozes saturu, kas papildināta ar insulīnu un deksametazonu (SF3D).Šūnas tika raksturotas pēc viena slāņa paplašināšanas un pēc 3D kultūras ar plūsmas citometriju, gēnu ekspresiju un histoloģiju.Tika raksturotas agrīnās izmaiņas signalizācijas transdukcijas ceļos rediferenciācijas laikā. P2 šūnām bija 99% CD44(+) un 40% CD105(+) cilmes antigēna profils un gēnu ekspresijas profils, kas liecina par starpzonu šūnām.P2 SF3D ekspresēja hondrogēnos gēnus un uzkrāto ekstracelulāro matricu.Insulīna receptoru (IR) pazemināšana ar HNMPA-(AM3) vai PI-3/AKT kināzes ceļš (aktivēts ar insulīna ārstēšanu) ar Wortmannin inhibēja kolagēna sintēzi.HNMPA-(AM3) samazināja Col2, Col11 un IR gēnu, kā arī Sox6 un -9 ekspresiju.Ar HNMPA-(AM3) apstrādāto šūnu koimunoprecipitācijas un hromatīna imūnprecipitācijas analīzes parādīja koaktivatoru Sox6 un Med12 saistīšanos ar Sox9, bet samazināja Sox9-Col2a1 saistīšanos. Mēs aprakstām jaunu kultivēšanas metodi, kas ļauj palielināt hondrocītu skaitu un veicina hialīnam līdzīgu skrimšļa audu veidošanās daļēji ar insulīna mediētu Sox9-Col2a1 saistīšanos.Ar šo pieeju iegūto audu piemērotība izmantošanai locītavu atjaunošanai ir jāpārbauda in vivo.