Produkti

Lai īpaši noteiktu vairāku 5-fluoruracila (5-FU) metabolītu un divu endogēno monofosfāta nukleotīdu daudzumu, mēs izstrādājām oriģinālu metodi, kuras pamatā ir šķidruma hromatogrāfijas-tandēma masas spektrometrija (LC-MS/MS).Šis tests ļāva noteikt: (i) 5-fluor-2'-dezoksiuridīna-5'-monofosfāta (5-FdUMP) intracelulāro veidošanos no 5-FU vai 5-fluor-2'-dezoksiuridīna (5-FdUrd) , (ii) 5-FdUMP koncentrācijas ietekmi uz intracelulāro 2'-dezoksiuridīna-5'-monofosfāta (dUMP)/timidīna-5'-monofosfāta (TMP) attiecību un (iii) 5-FdUMP sekrēcijas apjomu un 5-FU no cilvēka kultivētām šūnām ar ABC transportieriem.Mūsu eksperimentālajos apstākļos šūnas tika inkubētas ar 5-FU vai 5-FUrd.Pēc tam šūnu olbaltumvielas tika izgulsnētas ar metanolu.Šī procedūra nodrošināja augstu ekstrakcijas atgūšanu.Turklāt, lai izmērītu 5-FU un 5-FdUMP sekrēciju no šūnām, mēs veicām šo molekulu kvantitatīvo noteikšanu barotnē.Barotnes tika vai nu tieši injicētas (5-FU), vai arī tika veikta cietās fāzes ekstrakcija, izmantojot Oasis Wax ekstrakcijas kasetni (5-FdUMP).Analītu atdalīšana tika veikta uz dC18 Atlantis 3, 5 μm, (100 mm × 2, 1 mm id) kolonnas ar izokrātisku režīmu, izmantojot amonija formiāta buferšķīdumu/metanolu/ūdeni (5/5/90, v/v) kā kustīgo fāzi.Skrējiena laiks nepārsniedza 6,2 min.Analīti tika jonizēti elektrosmidzināšanas saskarnē negatīvo jonu režīmā.Mēs apstiprinājām metodi diapazonā no 2, 5 līdz 150 ng ml -1 atbilstoši savienojumiem.Testu iekšējās un starppārbaudes mainīgums septiņu dienu laikā bija mazāks par 10%.Visi savienojumi bija stabili šūnās vai barotnē, ja paraugi tika uzglabāti -20 ° C temperatūrā vismaz divas nedēļas un pēc trim sasaldēšanas-atkausēšanas cikliem.Abos barotnēs netika novērots matricas efekts.