Produkti

Kolicīna E1 kanāla domēna membrānas topoloģija tika pētīta ar fluorescences rezonanses enerģijas pārnesi (FRET).FRET ietvēra ģenētiski kodētu fluorescējošu aminoskābi (kumarīnu) kā donoru un selektīvi marķētu cisteīna atlikumu, kas bija saistīts ar DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimīdu) kā FRET akceptoru.Fluorescējošais kumarīna atlikums tika iekļauts proteīnā, izmantojot ortogonālu tRNS / aminoacil-tRNS sintetāzes pāri, kas ļāva selektīvi iekļauties jebkurā vietā kolicīna kanāla domēnā.Katrs variants saturēja stop (TAG) mutāciju kumarīna iekļaušanai un cisteīna (TGT) mutāciju DABMI pievienošanai.Izmantojot FRET analīzi gan šķīstošajiem, gan ar membrānu saistītajiem stāvokļiem, tika noteikti seši starpspirālie attālumi 1–6.FRET dati uzrādīja lielas izmaiņas starpspirāļu attālumos starp 3–6 spirālēm pēc membrānas asociācijas, sniedzot jaunu ieskatu kanāla domēna ar membrānu saistītajā struktūrā.Kopumā kumarīna-DABMI FRET starpspirāļu efektivitāte samazinājās, saistoties ar membrānu, balstoties uz kolicīna kanāla jumta modeli.Pamatojoties uz pašreizējiem un iepriekš publicētajiem FRET datiem, tika izstrādāts provizorisks kanāla domēna slēgtā stāvokļa modelis.Modelis ierosina spirāles 1–7 apļveida izkārtojumu pulksteņrādītāja virzienā no ārpusšūnu puses un spirāles 1, 6, 7 un 10 membrānas saskarnes savienojumā ap centrālo transmembrānu matadatu, ko veido 8. un 9. spirāles.