Produkti

Patogēnie molekulārie ceļi aknu cirozes slimībās, piemēram, C hepatīta vīruss (HCV), autoimūns hepatīts (AIH) un primārā biliārā ciroze (PBC), ir slikti raksturoti.Atšķirīgi izteikti gēni bieži ir svarīgi slimības patoģenēzē.Supresijas subtraktīvā hibridizācija (SSH) ir genoma mēroga pieeja, kas bagātina diferencēti izteiktus mRNS transkriptus.Mūsu mērķis bija veikt jaunus novērojumus par diferenciālo gēnu ekspresiju cirozes gadījumā, izmantojot SSH kombinācijā ar kvantitatīvu reālā laika reversās transkriptāzes polimerāzes ķēdes reakciju (RT-PCR).Aknu transkriptus HCV cirozes, AIH cirozes, PBC un neslimu aknu audu gadījumā pārbaudīja ar SSH.Iegūtie komplementārie DNS (cDNS) kloni tika atkārtoti pārbaudīti diferenciālai ekspresijai, izmantojot dot-blot hibridizāciju, un pēc tam sekvencēti.Atlasītā gēnu ekspresija tika kvantitatīvi noteikta ar reāllaika RT-PCR.Pēc SSH tika atkārtoti pārbaudīti 694 kloni, lai noteiktu diferencētu gēnu ekspresiju, no kuriem 145 tika sekvencēti un konstatēts, ka tie iegūti no 89 dažādiem gēniem.Septiņi kloni bija homologi tikai ar izteiktas sekvences tagu (EST) sekvencēm, kas kodē gēnus, kuriem nav zināmas funkcijas.Četru gēnu pastiprināti regulēta ekspresija tika apstiprināta ar reāllaika RT-PCR: transmembrānas 4 virsģimenes loceklis 3 (tetraspanīns CO-029) visās cirozes formās, ezis mijiedarbojošs proteīns (HIP) AIH cirozes gadījumā un hitināze 3-like-1 (HC gp-39 vai ykl-40) un arginīna-glutamīnskābes atkārtojums (RERE) HCV cirozes gadījumā.RERE gēnu polimorfismi un savienojuma varianti tika novēroti visos pārbaudītajos audos.Tetraspanīna CO-029 regulēšana galvenokārt tika lokalizēta žultsvadu šūnās.Visbeidzot, tika veikti jauni novērojumi par diferenciālo gēnu ekspresiju cilvēka cirozes gadījumā, izmantojot SSH kā primāro atklāšanas rīku.Jo īpaši ir nepieciešami turpmāki RERE gēna un tā produktu pētījumi ar HCV saistīto aknu slimību.