Produkti

Vairāk nekā 70% zemas pakāpes gliomu gēnā, kas kodē izocitrāta dehidrogenāzi 1 (IDH1), ir heterozigota R132H mutācija.Tas piešķir fermentam jaunu spēju pārveidot α-ketoglutarātu par 2-hidroksiglutarātu, kas galu galā izraisa audzēju veidošanos.Galvenais 2-hidroksiglutarāta ražošanas avots ir glutamīns, kas vēža gadījumā ir arī trikarbonskābes cikla (TCA) anaplerozes avots.Alternatīvs anaplerozes avots ir piruvāta plūsma caur piruvāta karboksilāzi (PC), kas ir izplatīts ceļš normālos astrocītos.Šī pētījuma mērķis bija noteikt, vai PC kalpo kā TCA anaplerozes avots IDH1 mutantu šūnās, kurās glutamīns tiek izmantots 2-hidroksiglutarāta ražošanai. Tika pētīti iemūžināti normāli cilvēka astrocīti, kas izstrādāti, lai ekspresētu heterozigotu mutantu IDH1 vai savvaļas tipa IDH1.Piruvāta plūsma caur PC un piruvāta dehidrogenāzi (PDH) tika noteikta, izmantojot magnētiskās rezonanses spektroskopiju, lai pārbaudītu [2-¹3C]glikozes atvasinātā ¹³C-iezīmētā glutamāta un glutamīna marķēšanu.Lai noteiktu attiecīgo enzīmu ekspresiju un aktivitāti, tika izmantoti aktivitātes testi, RT-PCR un Western blotēšana.Vēža genoma atlanta (TCGA) dati tika analizēti, lai novērtētu enzīmu ekspresiju cilvēka gliomas paraugos. Salīdzinot ar savvaļas tipa šūnām, IDH1 mutācijas šūnas ievērojami palielināja frakcionēto plūsmu caur PC.Tas bija saistīts ar ievērojamu PC aktivitātes un izteiksmes pieaugumu.Vienlaikus PDH aktivitāte ievērojami samazinājās, ko, iespējams, izraisīja ievērojami palielināta inhibējošā PDH fosforilācija ar PDH kināzi 3. Saskaņā ar novērojumiem šūnās TCGA datu analīze liecināja par būtisku PC ekspresijas palielināšanos mutantu IDH ekspresējošos cilvēka gliomas paraugos, salīdzinot ar savvaļas gliomas paraugiem. tipa IDH. Mūsu atklājumi liecina, ka izmaiņas PC un PDH var būt svarīga daļa no šūnu adaptācijas IDH1 mutācijai un var kalpot kā potenciālie terapeitiskie mērķi.