Produkti

Veids, kādā vienlaicīgu mutāciju ietekme apvienojas, mainot enzīmu aktivitāti, nav viegli paredzams, jo šie efekti ne vienmēr ir lineāri aditīvi.Tādējādi substrātu saistošo aminoskābju atlikumu vienlaicīgu mutāciju ietekmes raksturojums var sniegt būtisku ieguldījumu fermentu substrāta specifikas izpratnē.Spodoptera frugiperda (Sfbetagly) beta-glikozidāzē abi Q39 un E451 atliekas mijiedarbojas ar substrātu, un tas ir būtiski, lai noteiktu substrāta specifiku.Sfbetagly dubultmutanti (A451E39, S451E39 un S451N39) tika sagatavoti ar uz vietas vērstu mutaģenēzi, ekspresēti baktērijās un attīrīti, izmantojot afinitātes hromatogrāfiju.Šie fermenti tika raksturoti, kā substrātus izmantojot p-nitrofenil-beta-galaktozīdu un p-nitrofenil-beta-fukozīdu.K cat/Km attiecība Sfbetagly atsevišķiem un dubultiem mutantiem, kas satur uz vietni vērstas mutācijas pozīcijās Q39 un E451, tika izmantota, lai pierādītu, ka dubulto mutāciju (Gdouble) ietekme uz ESdouble dunča (enzīmu pārejas stāvokļa kompleksa) brīvo enerģiju. daggerxy) nav atsevišķu mutāciju (Gdouble daggerx un Gdouble daggery) radīto efektu summa.Šī atšķirība Gdouble duncī norāda, ka atsevišķu mutāciju ietekme daļēji pārklājas.Tādējādi šis kopīgais efekts tiek ņemts vērā tikai vienu reizi Gdouble daggerxy.Kristalogrāfiskie dati par beta-glikozidāzēm atklāj divzobu ūdeņraža saites klātbūtni, kas ietver Q39 un E451 atlikumus un to pašu substrāta hidroksilgrupu.Tāpēc gan termodinamiskie, gan kristalogrāfiskie dati liecina, ka atlikumi Q39 un E451 savstarpēji ietekmē to attiecīgo mijiedarbību ar substrātu.